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施用芽孢桿菌對(duì)蝦池底泥細(xì)菌群落的影響

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    發(fā)表于 2012-7-27 14:18:07 |只看該作者 |倒序?yàn)g覽
    摘自《生態(tài)學(xué)雜志》
    摘要    對(duì)施用芽孢桿菌制劑后蝦池底泥細(xì)菌群落的變化進(jìn)行了研究。結(jié)果表明,芽孢桿菌制劑改變了蝦池底泥細(xì)菌類(lèi)群組成,增加了底泥好氧細(xì)菌的數(shù)量。利用Shannon-Wiener 指數(shù)進(jìn)行生物多樣性分析,發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)池和對(duì)照池底泥細(xì)菌的多樣性指數(shù)(H) 、豐度(D) 和均勻度(J) 在整個(gè)養(yǎng)殖過(guò)程的動(dòng)態(tài)變化相似,前期較低,中期、后期和末期都有不同程度的升高。但是,與對(duì)照池相比,試驗(yàn)池的優(yōu)勢(shì)菌屬發(fā)生了變化,黃桿菌屬和粘纖維菌屬數(shù)量增加,而弧菌和發(fā)光細(xì)菌數(shù)量相對(duì)減少,且對(duì)蝦的成活率、體重和產(chǎn)量提高。

    關(guān)鍵詞 芽孢桿菌,細(xì)菌群落,斑節(jié)對(duì)蝦,底泥

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    1 引言
        養(yǎng)殖過(guò)程實(shí)際上就是一個(gè)污染水體、破壞原水體微生態(tài)系統(tǒng)的過(guò)程。當(dāng)有機(jī)物不斷積累,溶解氧慢慢耗盡時(shí)或有抑制微生物生長(zhǎng)的物質(zhì)時(shí),水體的自凈作用就會(huì)受到限制甚至停止。通過(guò)添加外源的微生態(tài)制劑可以增強(qiáng)水體的自凈能力。微生態(tài)制劑在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的有效應(yīng)用已經(jīng)得到了肯定,但是仍然存在著許多問(wèn)題需要進(jìn)一步探討和研究。國(guó)內(nèi)外對(duì)微生態(tài)制劑的研究大多在應(yīng)用效果上[ 4,,對(duì)其作用機(jī)制的研究是薄弱環(huán)節(jié),特別是關(guān)于施用微生態(tài)制劑后細(xì)菌類(lèi)群變化的研究報(bào)道較少。底泥細(xì)菌是養(yǎng)殖池生態(tài)系的重要組分,在促進(jìn)池底有機(jī)物分解、減少有機(jī)物積累、保持良好水質(zhì)環(huán)境等方面具有重要作用。本文研究了芽孢桿菌制劑對(duì)斑節(jié)對(duì)蝦養(yǎng)殖過(guò)程中蝦池底泥細(xì)菌類(lèi)群的影響,探討了微生態(tài)制劑的作用機(jī)制,擬為養(yǎng)蝦生產(chǎn)科學(xué)管理水質(zhì)、減免蝦病發(fā)生提供理論依據(jù)。

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    發(fā)表于 2012-7-27 14:20:23 |只看該作者
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    2 材料與方法
    2.1蝦池管理
        試驗(yàn)共用三個(gè)條件相似,面積約5315 hm2 的土池,其中1# 、2# 池作為試驗(yàn)池,3# 池作空白對(duì)照。在放苗前兩周,池內(nèi)注水30~ 40 cm,用100 mg·L-1漂白粉、300 mg·L-1生石灰進(jìn)行消毒,放苗前7~ 10 d,水深加至100 cm,并用115 mg·L-1藻類(lèi)生長(zhǎng)素,30 mg·L-1茶麩肥水。放苗前2~ 3 d,1# 、2#池施用115 g·m-3的芽孢桿菌( 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所生產(chǎn),粉狀,含芽孢桿菌活菌數(shù)2×108 CFU·g - 1) 。放苗后,每隔14~ 21 d,試驗(yàn)池按0175 g·m-3水體的用量投放芽孢桿菌1 次。對(duì)照池除了不投放芽孢桿菌外,其它管理措施與試驗(yàn)池相同。
    2.2樣品采集
        試驗(yàn)時(shí)間為2001 年5~ 7 月,分別在前期( 5 月6 日) 、中期( 6 月19 日) 、后期( 7 月17 日) 和末期( 7月31 日) 用采泥器在蝦塘定點(diǎn)采底泥,用無(wú)菌的藥匙剝?nèi)ケ韺蛹s5 mm,無(wú)菌收集底泥,帶回實(shí)驗(yàn)室。準(zhǔn)確稱取5 g 底泥,溶于裝有45 ml 無(wú)菌海水的三角瓶中,加吐溫- 80 至終濃度5 mg·L-1,搖床震蕩20~ 30 min,10 倍系列稀釋?zhuān)謩e涂布普通海水培養(yǎng)基2216E 和弧菌選擇性培養(yǎng)基TCBS 平板,分離純化單菌落后保種待鑒定。
    2.3總異養(yǎng)細(xì)菌計(jì)數(shù)
        底泥菌液經(jīng)稀釋后,選取合適的稀釋度分別涂布普通海水培養(yǎng)基2216E,28℃培養(yǎng)7 d 后計(jì)數(shù),計(jì)算出每1 g 底泥總異養(yǎng)細(xì)菌數(shù)TPC。
    2.4 細(xì)菌鑒定
        按美國(guó)的Oliver 細(xì)菌鑒定系統(tǒng)[3] 及文獻(xiàn)[1] 將養(yǎng)殖前期、中期、后期和末期蝦池底泥的細(xì)菌鑒定到屬。鑒定項(xiàng)目包括形態(tài)觀察、革蘭氏染色、鞭毛染色、葡萄糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)、運(yùn)動(dòng)性實(shí)驗(yàn)、氧化酶反應(yīng)、色素產(chǎn)生和觸酶反應(yīng)等。
    2.5 細(xì)菌多樣性
        根據(jù)生態(tài)學(xué)原理,按屬的水平來(lái)分析蝦池微生物多樣性,分別用Shannon-Wiener 多樣性指數(shù)(H) 、豐度( D) 和均勻度( J) [13] 的指數(shù)值表示。計(jì)算公式如下:
        H = -∑Pi log2 P 1
        D = ( S - 1) / log2N
        J = H / log2S
        式中,Pi為i種的個(gè)數(shù)與樣品中總個(gè)數(shù)的比值,S為采樣點(diǎn)中樣品的總種類(lèi)數(shù),N為樣品中細(xì)菌總數(shù)。

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    發(fā)表于 2012-7-27 14:22:30 |只看該作者
    本帖最后由 cjlittlepig 于 2012-7-27 14:23 編輯

    3 結(jié)果與分析
    3.1 養(yǎng)殖效果
        使用SAS 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)表1 數(shù)據(jù)進(jìn)行T 檢驗(yàn),結(jié)果表明,試驗(yàn)組對(duì)蝦的成活率,體重以及產(chǎn)量都顯著高于對(duì)照組( P < 0105) ,說(shuō)明施用了芽孢桿菌的池塘養(yǎng)殖效果明顯比未施放芽孢桿菌的池塘好。
    3.2 總異養(yǎng)細(xì)菌數(shù)的變化
        如圖1所示,在整個(gè)養(yǎng)殖過(guò)程中,試驗(yàn)池底泥總異養(yǎng)細(xì)菌數(shù)量大致呈增加的趨勢(shì),而對(duì)照池的呈下降趨勢(shì)。1# 池從前期的0.74 × 106 CFU·g - 1增加到末期的14 × 106 CFU·g - 1,2# 池從前期的7.8 ×106 CFU·g - 1增加到末期的9.5 × 106 CFU·g - 1,而3# 對(duì)照池從前期42 × 106 CFU·g - 1一直下降到末期的1.6 × 106 CFU·g - 1。微生物的生長(zhǎng)繁殖具有生物特異性和環(huán)境適應(yīng)性,芽孢桿菌是人為添加入池塘的外源細(xì)菌,不一定能盡快成為優(yōu)勢(shì)菌而進(jìn)行微生態(tài)調(diào)節(jié),其對(duì)于池塘的影響是要經(jīng)過(guò)一段時(shí)間才能表現(xiàn)出來(lái)的。
    3.3細(xì)菌類(lèi)群的組成
        如表2 所示,在斑節(jié)對(duì)蝦養(yǎng)殖過(guò)程中,從3個(gè)蝦池底泥細(xì)菌共鑒定出244 株,其中對(duì)照池在整個(gè)過(guò)程均為革蘭氏陰性菌,而使用了芽孢桿菌的兩個(gè)試驗(yàn)池都有革蘭氏陽(yáng)性菌出現(xiàn),但還是以革蘭氏陰性菌占優(yōu)勢(shì)。
        在對(duì)照池,前期以假單胞菌屬占優(yōu)勢(shì)( 57.7%) ,中期以發(fā)光桿菌屬( 38.9% ) 為主,到了后期,以不動(dòng)桿菌屬( 41.2%) 占優(yōu)勢(shì),末期,假單胞菌屬、發(fā)光桿菌屬和弧菌屬稍占優(yōu)勢(shì)。在試驗(yàn)池,細(xì)菌類(lèi)群發(fā)生了變化,前期、中期以假單胞菌( 25% ~ 63%) 占優(yōu)勢(shì),后期主要以黃桿菌屬( 44.4%,2,池) 或假單胞菌屬( 23.8% ,1,池) 為優(yōu)勢(shì),到了末期黃桿菌屬( 25%~ 43.8%) 占優(yōu)勢(shì)。
    3.4細(xì)菌多樣性
        試驗(yàn)池和對(duì)照池底泥細(xì)菌的多樣性指數(shù)、豐度和均勻度在整個(gè)養(yǎng)殖過(guò)程的動(dòng)態(tài)變化相似,前期較低,中期、后期和末期都有不同程度的升高(表3) 。

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    發(fā)表于 2012-7-27 14:24:24 |只看該作者
    本帖最后由 cjlittlepig 于 2012-7-27 14:26 編輯

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        與海洋、湖泊等自然水體比較,養(yǎng)殖池塘是人工控制的小生態(tài)系統(tǒng),其中的各種理化因子、生物因子關(guān)系十分復(fù)雜,并且處于不斷波動(dòng)變化之中。底泥細(xì)菌群落由多種細(xì)菌類(lèi)群組成,是養(yǎng)殖池塘生態(tài)環(huán)境的重要組成部分,底泥細(xì)菌的組成直接或間接受控于底泥內(nèi)部復(fù)雜的理化及生物因子的綜合作用。養(yǎng)殖過(guò)程中,添加外源的有益菌種,目的在于通過(guò)人工調(diào)控作用,改變底泥菌種組成,及時(shí)分解底泥的有機(jī)污染物,有效地抑制病原菌的繁殖,為對(duì)蝦生長(zhǎng)創(chuàng)造良好的生態(tài)環(huán)境。
        在養(yǎng)殖過(guò)程中的飼料利用率并不高,僅有小部分的飼料轉(zhuǎn)為水產(chǎn)品,未被利用的有機(jī)飼料轉(zhuǎn)化為溶解性的養(yǎng)分或沉積于底泥中,使得底泥中的有機(jī)污染物大量積聚,為異養(yǎng)菌的繁殖創(chuàng)造了條件,但同時(shí)也會(huì)造成缺氧影響異養(yǎng)細(xì)菌的生存和功能。芽孢桿菌存在于底泥環(huán)境中,能直接利用底泥中一些不溶性有機(jī)物( 如殘餌、動(dòng)物排泄物) ,減少了可溶性有機(jī)物的數(shù)量,從而使底泥的化學(xué)需氧量降低[ 5,,促進(jìn)了好氧細(xì)菌的繁殖,增加了底泥異養(yǎng)細(xì)菌的數(shù)量,從而加速了對(duì)有機(jī)污染物的降解。因此,大多數(shù)施用了芽孢桿菌制劑后的池塘,在養(yǎng)殖后期都可以保持相對(duì)好的水質(zhì)和藻相[2] 。本研究明,施用了芽孢桿菌后,試驗(yàn)池底泥總異養(yǎng)細(xì)菌數(shù)量增加了,在一定程度上增強(qiáng)了對(duì)有機(jī)污染物的分解能力。
        本實(shí)驗(yàn)多樣性指數(shù)的分析說(shuō)明,施用了芽孢桿菌后,對(duì)蝦池底泥細(xì)菌多樣性指數(shù)影響不大,但是,試驗(yàn)池與對(duì)照池的細(xì)菌組成的變化有一定差異。養(yǎng)殖過(guò)程中,試驗(yàn)池由于芽孢桿菌的存在,促進(jìn)了其他革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌的生長(zhǎng),如小球菌屬和棒狀桿菌屬等,但是同時(shí)也控制了另一些微生物的繁殖,如弧菌和發(fā)光桿菌等。革蘭氏陽(yáng)性菌和陰性菌共存可使底泥細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)更為完善,對(duì)維持養(yǎng)殖水體微生態(tài)環(huán)境的穩(wěn)定性具有一定的生態(tài)學(xué)意義。同時(shí),試驗(yàn)池施用了芽孢桿菌后,促進(jìn)了黃桿菌屬和粘纖維菌屬細(xì)菌的生長(zhǎng)。黃桿菌屬- 粘纖維菌屬是海洋中的重要細(xì)菌類(lèi)群,可占細(xì)菌總量的15% ~ 25%[ 912] 。黃桿菌屬和粘纖維菌屬的增加,意味著蝦池底泥環(huán)境更接近海洋的自然生態(tài)環(huán)境,有利于對(duì)蝦生長(zhǎng)。
        另外,底泥細(xì)菌群落中也存在著大量病原微生物如弧菌屬和發(fā)光細(xì)菌[6]、條件致病微生物如假單胞菌屬和氣單胞菌屬[7] 以及非致病微生物( 包括有益微生物) 等,它們之間相互影響與制約,一類(lèi)微生物群體的消長(zhǎng)將會(huì)影響到另一類(lèi)微生物的數(shù)量變化,進(jìn)而影響到養(yǎng)殖對(duì)象的健康。本研究表明,芽孢桿菌改善了底泥中細(xì)菌的組成,控制了主要病原菌如弧菌和發(fā)光細(xì)菌的生長(zhǎng)。從表2 可以看到,在對(duì)照池中期、后期和末期中,發(fā)光桿菌一直占據(jù)優(yōu)勢(shì)地位( 24% ~ 38.9% ) ,但是使用了芽孢桿菌的兩個(gè)試驗(yàn)池,發(fā)光桿菌在后期明顯地減少( 1,池占9.5% ,2,池占5.6%) ,并在中后期有效地控制了弧菌的數(shù)目。假單胞菌屬也是對(duì)蝦致病菌之一[ 6] ,在三個(gè)池中,假單胞菌屬都占有一定的比例,但在養(yǎng)殖末期試驗(yàn)池中的假單胞菌屬數(shù)量明顯減少。施用了芽孢桿菌后,試驗(yàn)池的革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌都開(kāi)始增長(zhǎng),也可抑制部分革蘭氏陰性細(xì)菌的繁殖。
        因此,添加有益微生物不僅可以控制、減少或促進(jìn)其他微生物的繁殖,同時(shí)改善環(huán)境中的微生物群落結(jié)構(gòu),維持微生態(tài)系統(tǒng)的生態(tài)平衡,為對(duì)蝦的生長(zhǎng)提供了一個(gè)穩(wěn)定的生態(tài)環(huán)境。
        本文初步探討了芽孢桿菌制劑對(duì)蝦池底泥細(xì)菌群落的影響,是對(duì)施用芽孢桿菌制劑后,蝦池底泥生物因子變化的初步研究。從實(shí)驗(yàn)的養(yǎng)殖效果來(lái)看,芽孢桿菌的施用提高了對(duì)蝦成活率、體重和產(chǎn)量。但是,對(duì)蝦的生長(zhǎng)不僅取決于池塘各種生物因子,還取決于池塘各種理化因子。關(guān)于芽孢桿菌的施用引起的底泥細(xì)菌群落的變化與水質(zhì)的關(guān)系以及對(duì)對(duì)蝦生長(zhǎng)的影響機(jī)制較為復(fù)雜,有待進(jìn)一步的研究。

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    發(fā)表于 2012-9-17 11:20:56 |只看該作者
    這樣大篇幅額粘貼文章,哥還是分析一下吧 如何利用這些信息應(yīng)用生產(chǎn)!
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    發(fā)表于 2012-9-17 11:27:38 |只看該作者
    蟲(chóng)子的悲哀 發(fā)表于 2012-9-17 11:20
    這樣大篇幅額粘貼文章,哥還是分析一下吧 如何利用這些信息應(yīng)用生產(chǎn)!

    呵呵,我只是信息傳播者!我缺乏這方面的實(shí)踐,不能隨便分享經(jīng)驗(yàn)咯,誤導(dǎo)人,那就不好啦!你說(shuō)是吧,呵呵!

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    發(fā)表于 2012-9-17 14:16:19 |只看該作者
    樓主,經(jīng)常分享這些資料,還是多少有些指導(dǎo)意義的!{:soso_e129:}
    —及時(shí)雨  顧客的選擇,是我們服務(wù)的風(fēng)向標(biāo)!Q:515689973 T:13265939319
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    發(fā)表于 2012-9-28 10:24:24 |只看該作者
    小小御醫(yī) 發(fā)表于 2012-9-17 14:16
    樓主,經(jīng)常分享這些資料,還是多少有些指導(dǎo)意義的!

    謝謝支持,不枉費(fèi)我的堅(jiān)持

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    發(fā)表于 2014-10-22 11:33:51 |只看該作者
    謝謝分享,學(xué)習(xí)!
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    發(fā)表于 2014-10-23 08:36:57 |只看該作者
    apple 發(fā)表于 2014-10-22 11:33
    謝謝分享,學(xué)習(xí)!

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