本帖最后由 cjlittlepig 于 2012-7-4 16:45 編輯
摘自《水利漁業(yè)》
摘要:實(shí)驗(yàn)組光合細(xì)菌質(zhì)量濃度分別為2.5、5.0、10.0 g/m3,在第1、7、14、21、28天檢測(cè)鯉魚血液白細(xì)胞吞噬活性和血清溶菌酶活性等指標(biāo)。結(jié)果表明,該光合細(xì)菌制劑可以提高鯉魚白細(xì)胞的吞噬活性,增強(qiáng)血清溶菌酶活力。鯉魚的非特異性免疫功能隨著光合細(xì)菌制劑濃度的增加和潑灑時(shí)間的延長(zhǎng)呈現(xiàn)增強(qiáng)趨勢(shì)。
關(guān)鍵詞:光合細(xì)菌 鯉魚 吞噬功能;溶菌酶活性
隨著養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大,養(yǎng)殖產(chǎn)量的提高,水產(chǎn)動(dòng)物疾病頻發(fā)成為嚴(yán)重威脅水產(chǎn)業(yè)的一個(gè)突出問題。面對(duì)這一問題,水產(chǎn)工作者們開始尋找有效的解決方法。20世紀(jì)50年代抗生素廣泛地應(yīng)用于養(yǎng)殖業(yè),70年代人們認(rèn)識(shí)到其在帶來巨大效益的同時(shí)也帶來許多副作用⋯1,因此,人們開始尋找更加有效健康的藥物。近年來,維生素、中草藥、脂多糖、甲殼質(zhì)、肽聚糖,微生態(tài)制劑等免疫增強(qiáng)劑成為魚病防治研究的新熱點(diǎn)。微生態(tài)制劑不僅可凈化水質(zhì),無藥物殘留,不產(chǎn)生抗藥性,而且可以促進(jìn)魚類生長(zhǎng),提高其對(duì)環(huán)境的耐受力和應(yīng)激力,產(chǎn)生非特異性免疫調(diào)節(jié)因子,提高機(jī)體免疫力[2]。我們研究光合細(xì)菌制劑對(duì)魚類免疫機(jī)能的影響,探討其作用機(jī)理,為微生態(tài)制劑作為魚類疾病防治的藥物提供科學(xué)依據(jù)。
1 材料與方法
1.1 材料 1.1.1 試驗(yàn)魚鯉來自湖北宜昌市養(yǎng)殖基地.體質(zhì)健壯,無病元傷,質(zhì)量(80±7.5)g,共200尾。 1.1.2 養(yǎng)殖條件 水泥池4個(gè)(3.0 m×3.0 m×0.5m),每個(gè)池子放5O尾鯉,1號(hào)池為對(duì)照組。水溫20~25℃ ,溶氧5~6 mz/L,pH為6.8左右。1周換水1次(換池水的50%)。馴養(yǎng)2周后開始試驗(yàn)。 1.1.3 飼料及投喂飼料購于武漢海大飼料有限公司,為l號(hào)鯉魚配合飼料。每天投喂2次,投餌率3%~5%,以吃飽剩少許為準(zhǔn)。 1.1.4 金黃色葡萄球菌制備 將金黃色葡萄球菌接種于淡水魚類瓊脂培養(yǎng)基斜面上,28℃下培養(yǎng)24-48 h。無菌生理鹽水(質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.65%)洗下菌落,并稀釋成一定濃度,加入終質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的福爾馬林,28℃滅活24 h,用無菌生理鹽水清洗3次,調(diào)整細(xì)菌密度至1×108/ml,保存于4℃冰箱中備用。 1.1.5 微生態(tài)制荊 試驗(yàn)所用光合細(xì)菌制劑(PSB)系華中農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院實(shí)驗(yàn)所培養(yǎng),主要成分為沼澤紅假單胞菌,菌密度為5億~10億/g。實(shí)驗(yàn)組每7d投放菌液1次,每次劑量為1.0 g/m3,實(shí)驗(yàn)進(jìn)行35 d。 1.1.6 溶壁微球菌購于中科院北京微生物研究所中國普通微生物菌種保藏中心。 1.2 方法 1.2.1 溶壁微球菌的配制 將溶壁微球菌涂布于營養(yǎng)瓊脂上,28℃ 下培養(yǎng)過夜,以制備溶壁微球菌粉末,具體操作見參考文獻(xiàn)[3]。 1.2.2 血清及血細(xì)胞的收集 從鯉魚尾靜脈采血,一部分直接加入Eppendorf(1.5ml尖頭離心管)中以制備血清,用于溶菌酶測(cè)定,另一部分用來(無菌肝素鈉)抗凝,供測(cè)定白細(xì)胞吞噬活性。 1.2.3 吞噬細(xì)胞吞噬功能的測(cè)定 參考文獻(xiàn)[4]的方法。每次從尾靜脈取血1ml,置于含0.5ml肝素溶液(質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.2%)的試管中混勻,加入約0.5 mL的金黃色葡萄球菌液,充分混勻后于25℃ 下水浴60 min。水浴期間每隔10 min搖勻1次。取上述混合液涂片,每個(gè)血樣涂5片。自然晾干后滴加甲醇固定5~7 min,蒸餾水沖洗,Gien~a染色1~1.5 h,自來水沖洗后再用蒸餾水沖洗,晾干。油鏡觀察記錄結(jié)果。吞噬活性分別以吞噬百分比(Phagocytic Percentixge,PP)和吞噬指數(shù)(Phagocyticindex,PI)表示: 吞噬百分比(PP)=(100個(gè)吞噬細(xì)胞中參與吞噬的細(xì)胞數(shù)/100)×100%, 吞噬指數(shù)(PI)=(吞噬細(xì)胞內(nèi)的細(xì)菌總數(shù)/參與吞噬的吞噬細(xì)胞數(shù))×100% 1.2.4 溶菌酶活力的測(cè)定 主要依據(jù)文獻(xiàn)[5,6]的方法進(jìn)行。用0.067 mol/L PBS(pH 6.4)將溶壁微球菌配成0.2 mg/mL的菌懸液,每個(gè)樣品取3ml菌懸液,吸取40μL血清加入到3 mL菌懸液中混勻后立刻在540nm下測(cè)定A0值。然后在28℃ 水浴中溫育30min,取出后置于4℃水浴中以終止反應(yīng),再測(cè)定A值,按公式計(jì)算溶菌酶活力u=( A0一A)/A0。 |